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人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒说明书
点击次数： 49发布时间：2024/9/5 11:29:40
- 上 传 者： 上海岑特生物科技有限公司
- 上传时间： 2024/9/5 11:29:40
- 文件大小： 43KB
- 文件类型： docx
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 产品名称：人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)Elisa试剂盒
产品规格：48T/96T
本试剂盒仅供科研实验使用！
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入指标，再与HRP标记的-O-甲基转移酶（COMT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度
（OD值），通过标准曲线计算样品中指标浓度。
试剂盒组成：
（1）结合物及标本的稀释液；
（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（4）酶的底物；
（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；
洗板方法
A 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
B 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 所有孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
自备物品
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂应按标签说明书储存，使用恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
10．试剂盒保存：；2-8℃。
11．有效期：6个月
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