人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)ELISA试剂盒应用方法_资料下载

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被目标物抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标物呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)ELISA试剂盒

试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注

微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无

标准品 0.5mL*6管 0.5mL*6管按说明书复溶

样本稀释液 10mL 10mL 无

检测抗体-HRP 10mL 5mL 无

20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书稀释

底物A 6mL 3mL 无

底物B 6mL 3mL 无

终止液 6mL 3mL 无

封板膜 2张 2张无

说明书 1份 1份无

自封袋 1个 1个无

操作流程：

（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

（2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6 个月

人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)ELISA试剂盒

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