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人抗肝细胞膜抗体(LMA)ELISA试剂盒操作步骤
点击次数: 52发布时间:2024/4/22 11:36:03
- 上 传 者: 上海岑特生物科技有限公司
- 上传时间: 2024/4/22 11:36:03
- 文件大小: 21KB
- 文件类型: docx
- 所属分类: 操作维修手册
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资料简介: 人抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa试剂盒用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被该指标抗体的微孔中,依次加入标本,标准品、HRP标记的检测抗体。经过洗涤后用底物TMB显色。TMB在过气化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 人抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa试剂盒试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 人抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa试剂盒试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。 2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 自备物品 1. 酶标仪(450nm) 2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 人抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa试剂盒操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL; 3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。 4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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