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上海岑特生物科技有限公司 主营产品：ELISA试剂盒，质粒定制，各种动物血清，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，标准品对照品，培养基，抗体，细胞株，微生物，染色液溶液，实验耗材

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人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒简介说明

点击次数： 27发布时间：2024/3/26 11:43:37

  • 上 传 者： 上海岑特生物科技有限公司
  • 上传时间： 2024/3/26 11:43:37
  • 文件大小： 19KB
  • 文件类型： docx
  • 所属分类： 操作维修手册
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资料简介：  人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒实验原理：

试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（人核因子-κB亚基p65亲和肽NF-κB p65ELISA kit）已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
 
应用域：
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
 
产品组成部分
130 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7终止液6ml×1 瓶
2酶标试剂6ml×1 瓶8标准品（48nmol/L）0.5ml×1 瓶
3酶标包被板12 孔×8 条9标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4样品稀释液6ml×1 瓶10说明书1 份
5显色剂 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 张
6显色剂 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 个
 
操作流程如下:
(1)产品仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
 
注意事项:
1.从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。

人核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒

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