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上海岑特生物科技有限公司 主营产品:ELISA试剂盒,质粒定制,各种动物血清,酶联免疫试剂盒,白介素试剂盒,标准品对照品,培养基,抗体,细胞株,微生物,染色液溶液,实验耗材

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资料下载

总RNA提取试剂盒说明书

点击次数: 65发布时间:2022/2/21 13:23:12

  • 上 传 者: 昆山远慕生物科技有限公司
  • 上传时间: 2022/2/21 13:23:12
  • 文件大小: 30KB
  • 文件类型: docx
  • 所属分类: 操作维修手册
  • 下载次数: 5次
  • 查看次数: 65

资料简介: 总RNA提取试剂盒说明书
货号:R2352
规格:50T/100T
保存:2-8℃,有效期1年。

产品内容:

试剂盒组成 50T 100T 保存
裂解液 50mL 100mL 2-8℃
漂洗液 15mL 15mL×2 RT
洗柱液 50mL 50mL×2 RT
RNase free ddH2O 15mL 15mL×2 RT
RNase free吸附柱 50个 100个 RT
RNase free收集管(2ml) 50个 100个 RT











操作步骤:
          

​1. 样品处理:
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106 细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106 动物、植物和酵母细胞或每107 细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
  1. 将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
  2. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15,室温放置3-5分钟。
  3. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
  4. 吸附柱处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
  5. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm2min,弃废液。
  6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
  7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
  8. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  9. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项:
1.所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2.RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。
 

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