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四环素检定琼脂操作步骤
点击次数： 71发布时间：2021/12/29 14:34:48
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/12/29 14:34:48
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- 文件类型： docx
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 产品名称：四环素检定琼脂 成分（g/L） 检验原理 使用方法（计数用法）：
英文名称：Tetracyline Examination Agar
产品规格：250g
产品用途：用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
胰酪蛋白胨 6.0
牛肉浸粉 1.5
酵母浸粉 3.0
琼脂 14.0
pH值5.7-5.9 25℃
本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性有关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种微生物学方法。
1、称取本品24.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121摄氏度高压灭菌15min。
2、双碟的制备应在无菌室或洁净室内进行，并注意避免微生物及抗生素污染。培养基应在水浴中或微波炉内融化，避免直火加热。
3、双碟的底层：用灭菌大口20mL吸管或其它灭菌分装器，吸取已融化的培养基20mL注入双碟内，待凝固后加入菌层。(双碟内的培养基应均匀的分布于平皿内。)
4、菌层：取出试验用菌悬液，按预试好的加菌量[使0.05单位/mL浓度的四环素标准溶液可产生12mm以上的清晰、完整的抑菌圈]，用灭菌吸管吸取菌悬液适量，加入已融化并保温在水浴中(水浴温度50～60摄氏度)的培养基内，摇匀，作为菌层培养基使用。取出加有底层培养基的双碟，用灭菌大口5mL、10mL吸管或其他适宜分装器，吸取菌层培养基6mL，加于底层培养基上，使其均匀摊布，等凝固后放置钢管。
5、放置钢管：使用钢管放置器或小眼科镊子，使钢管平稳的落在培养基上，相应剂量的钢管对角均匀放置。钢管放妥后，双碟静置5~10分钟后，再开始滴加抗生素溶液。
6、c滴加抗生素溶液用灭菌毛细滴管或微量加样器(调节加样量约为200-300μL)，在滴加之用溶液洗2~3次。滴加标准品及样品溶液顺序，因实验设计方法不同而异。(2.2)法，在双碟的4个钢管中分别成“Z”字形滴加标准品及样品高、低两种浓度的溶液；在(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及样品高、中、低3种浓度，并使相同浓度成对角。滴加溶液至钢管口平满。
7、滴加完毕，用陶瓦盖覆盖双碟，平稳置于双碟托盘内，双碟叠放不可超过3层，将双碟托盘水平平稳地移入培养箱中间位置，在或该药品标准规定的温度下培养至所需时间。
8、抑菌圈测量：测量应检查抑菌圈是否圆整，如有破圈或圈不圆整，应舍弃该碟。可用抑菌圈测量仪或游标卡尺测量。
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