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资料下载

考马斯亮蓝快速染色液操作步骤

点击次数： 79发布时间：2021/12/28 13:33:01

  • 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
  • 上传时间： 2021/12/28 13:33:01
  • 文件大小： 15KB
  • 文件类型： docx
  • 所属分类： 应用方法
  • 下载次数： 4次
  • 查看次数： 79

资料简介：

产品名称：考马斯亮蓝快速染色液
规格：100ml/500ml
分类：蛋白检测
储存条件：4℃,避光,12个月
用途：SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测,同时进行凝胶固定和染色,而且不需要脱色液。
注意事项：主要由G250、弱酸、去离子水等组成,无需固定,无需脱色液。

产品简介：
考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速染色，亦可用于Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
考马斯亮蓝快速染色液采用自主研发的技术，在传统考马斯亮蓝快速染色液的基础上进行改良，是一种无毒的染色液，快速染色液只需1h，可以检测低达100ng的蛋白电泳条带。其核心优点在于：无需对凝胶进行固定，无需煮沸，无需脱色，染色时间短，操作更加简单。

自备材料：
1、水平摇床或侧摆摇床
2、蒸馏水
3、(可选)加热装置
4、20%甘油水溶液

操作步骤(仅供参考)：
1、PAGE电泳结束后取凝胶放入约50～100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5min，弃液，重复上述步骤1次。
2、弃蒸馏水，加入3～5倍体积以上的Commassie Blue Fast staining solution，使染色液能盖住凝胶。
3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中，在水浴锅或微波炉内加热至95～100℃，立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程，亦可省略。)
4、在摇床上摇动染色，蛋白量大的条带10～15min左右会出现，大部分蛋白条带会在30～60min 左右出现。一般情况下，5h能获得效果。
5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色，弃染色液。
6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色5～10min，以便减少背景干扰。
7、把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。

注意事项：
1、PAGE电泳后凝胶采用蒸馏水清洗的目的在于去除凝胶中的SDS等干扰物质。如果不能充分去除SDS会导致背景较高。如果凝胶很厚，洗涤时间应适当延长、洗涤次数应适当增加。蒸馏水洗涤去除凝胶中的杂质时，如果使用经过加热或沸腾的蒸馏水，每次洗涤时间可以缩短至 1～2min。
2、染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾，以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
3、如果希望染色的背景更低，希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡一段时间可以获得背景更低，条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡一段时间的已经进行了染色的凝胶再同一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的染色蛋白条带。
4、本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题：
1、无染色条带：可能上样量太少，建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。
2、背景太高：可能杂质没有除尽，建议延长zui初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后，把凝胶放置在蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡一段时间，通常可以取得较好的脱色效果。
3、染色条带的灵敏度不够理想：可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色，重复染色可以改善染色效果。在加热情况下染色可以显着提高检测灵敏度，另外染色后在室温或4℃用蒸馏水进行脱色也可以显着改善染色的灵敏度。

有效期：12个月有效。

考马斯亮蓝快速染色液

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