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Bradford蛋白定量试剂盒使用方法
点击次数： 57发布时间：2021/12/16 15:18:19
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/12/16 15:18:19
- 文件大小： 15KB
- 文件类型： docx
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 中文名称：Bradford蛋白定量试剂盒 产品简介： 目上常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。 Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响， 故在用Bradford Protein Assay Kit进行蛋白定量的时候，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用BCA Protein Assay Kit。 Bradford Protein Assay Kit检测速度很快，少量样品一般只需10min即可完成检测。检测浓度下限达到25μg/ml，小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl。在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 主要成分： 自备材料： 操作步骤（仅供参考）： 注意事项：
英文名称：Bradford Protein Assay Kit
产品规格：500次微孔板
储存条件：BSA附件-20℃，其它试剂4℃
试剂(A): 主要由G250、缓冲液等组成。
试剂(B): 主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂等组成。
1、 酶标仪或分光光度计
2、 微量移液器
3、 双蒸水
4、 96孔板
1、 完全溶解蛋白标准(BSA 5mg/ml)，按蛋白标准:稀释液=1:9进行稀释，如取蛋白标准10μl稀释溶解于稀释液90μl，使终浓度为0.5mg/ml。注意，蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也宜用什么溶液稀释。也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准(BSA 5mg/ml)。
2、 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足到20μl。
3、 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液到20μl。
4、 各孔加入200μl G250染色液，室温放置3～5min。
5、 用酶标仪测定A595，或560~610nm之间的其它波长的吸光度。
6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
1、 G250染色液使用充分混匀。
2、 G250染色液回复至室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
3、 蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
4、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
5、 需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，佳检测波长为595nm，并需96孔板。
6、 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
7、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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