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酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)详细说明
点击次数： 77发布时间：2021/9/24 13:34:20
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/9/24 13:34:20
- 文件大小： 19KB
- 文件类型： docx
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 中文名称：酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 产品简介： 自备材料： 操作步骤 (仅供参考)： (二)冰冻切片： (三)石蜡切片： 染色结果： 临床意义： 注意事项：
规格：2×50ml
分类：酶类染色
储存方式：4℃,避光,6个月
产品用途：细胞和组织的酸性磷酸酶染色
注意事项：主要由萘酚、六氮化对品红、亚硝酸钠等组成,染色后酶活性部位呈红色。
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5～5.5。酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI 为底物，在酸性pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等，亦可用于石蜡切片。
1、 蒸馏水、恒温箱
2、 载玻片、推玻片
3、 光学显微镜
(一)血液、细胞涂片：
1、 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液
的正方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳
向滑动至铺满血膜为止。
2、 自然晾干，ACP固定液4°C固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入ACP 孵育液，置于37°C温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、 复染：苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、 水洗、晾干、镜检。
1、 冰冻切片回温至37°C，水中浸泡1～2min。
2、 自然晾干，ACP固定液4°C固定1～3min。
3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4、 切片入ACP孵育液，置于37°C温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5、 复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
6、 水洗、晾干、镜检。
1、 石蜡切片脱蜡5～10min，重复一次。
2、 无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min。
3、 水洗2min。
4、 自然晾干，ACP 固定液4°C固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
5、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
6、 切片入ACP 孵育液，置于37°C温箱，浸染45～60min，水洗。
7、 复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
8、 水洗、晾干、镜检。
阳性颗粒 紫红色
细胞核 蓝色（苏木素）或绿色（甲基绿）
1、白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制。
2、急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一。
3、T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4、戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
1、ACP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色
2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4、组织固定需在4°C冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
5、组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56°C。应使用熔点为52～54°C的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
6、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR以上的二甲苯。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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