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中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)实验步骤
点击次数： 123发布时间：2021/9/16 14:05:51
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/9/16 14:05:51
- 文件大小： 17KB
- 文件类型： docx
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 产品名称：中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需适pH 9.2~9.8。中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。 操作步骤(仅供参考)： 临床意义： 注意事项：
产品规格：3×10ml
产品用途：门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
注意事项：碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。油镜下计数101个中性粒细胞,求出百分比和积分。非特异性反应少,结果可靠。
储存条件：4℃,避光,6个月
(一)、涂片
1、制备新鲜血液或骨髓细胞涂片，NAP固定液固定，充分水洗。
2、滴加配制好的NAP孵育液孵育，水洗。
3、滴加核固红染色液或甲基绿染色液复染。水洗、晾干、镜检。
(二) 贴壁培养细胞
1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。
2、加入NAP固定液固定30～60s或4%多聚甲醛固定，PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液，放入湿盒中，避光孵育，PBS清洗。
4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染。PBS清洗、镜检。
1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。
2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。
3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS积分常减低。
1、血液或骨髓细胞涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2、培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。
3、NAP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
4、复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。
5、每次染色时，应有阳性对照片。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
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