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资料下载

DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)简介

点击次数: 67发布时间:2021/4/27 15:55:52

  • 上 传 者: 上海古朵生物科技有限公司
  • 上传时间: 2021/4/27 15:55:52
  • 文件大小: 95KB
  • 文件类型: jpg
  • 所属分类: 应用方法
  • 下载次数: 3次
  • 查看次数: 67

资料简介: 【产品名称】DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
【规格】10ml
【分类】细胞其他
【储存条件】-20℃,6个月
【用途】转染DNA到细胞中
【注意事项】主要由DEAE-葡聚糖、TBS组成。

简介:将DNA导入细胞的方法很多,采用DEAE-葡聚糖转染法主要优点是相对简单、快速、同次试验内和不同次实验间的重复性较好,该法尤其适用于瞬时转染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶剂溶解,经过滤除菌,临用37℃保温并充分混匀。

操作步骤(仅供参考):
1、取对数生长期的细胞,制备成细胞悬液。将细胞密度调整到5×105个/ml接种至6孔板,培养12~24h。
2、用蒸馏水或TE将质粒DNA稀释,将DNA溶液直接加到转染培养液至其终浓度为1.0μg/ml。
3、将DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)预热并颠倒混匀,加到DNA/转染培养液使DEAE-葡聚糖终浓度为100μg/ml,蕞适浓度需要自行摸索。
4、将50~70%汇片的细胞培养物中的培养液轻轻吸出,换上适合体积的补充有DEAE-葡聚糖/DNA/转染培养液孵育。
5、倒置显微镜下观察细胞,细胞内会出现颗粒,有的细胞核出现固缩,有的细胞边缘出现部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖转染常伴有25~75%的细胞死亡。
6、换用100mmol/L氯喹培养液继续培养,进行下游实验。

注意事项:
1、某些特点细胞需要较长的转染时间,因为氯喹有细胞毒性,可在转染的蕞后时期加入。
2、转染时,摇动细胞可保障转染效率均,蕞适转染时间需通过实验确定。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴次性手套操作。

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