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植物过氧化物酶(POD)提取试剂实验步骤
点击次数： 145发布时间：2021/2/23 11:06:38
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/2/23 11:06:38
- 文件大小： 92KB
- 文件类型： jpg
- 所属分类： 应用方法
- 下载次数： 4次
- 查看次数： 145
资料简介： 中文名称:植物过氧化物酶(POD)提取试剂
储存条件：4℃，12个月
产品规格：500ml
产品用途：植物过氧化物酶(POD)提取液主要用于裂解植物组织，提取植物样品中的过氧化物酶。该试剂仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途
产品简介：过氧化物酶(peroxisome，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
试剂：
(1)0.1%愈创木酚
(2)0.18% H2O2:取30%H2O2 3ml，蒸馏水定量至500ml
(3)标准母液：吸取 5% K2Cr2O7 1.2ml和纯化的10%Co（NO3）2 溶液50ml，混合后加蒸馏水稀释7倍，即为每毫升相当于6.75μg四邻甲氧基苯酚标准母液
方法步骤：
（1）标准曲线的制作：取20ml具塞试管6支，编号，按下表配制四邻甲氧基苯酚标准系列溶液，混匀后以1号管调零，于470 nm波长下测定吸光度，以标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。或用计算器求出吸光度（Y）随标准液浓度（X）变化的线性回归方程。
2）POD的提取：取待测植物样品（如叶片等），剪碎混匀，称取0.5〜1.0 g于研钵中，加少量 石英砂、CaC03和适量蒸馏水，冰浴研磨匀浆，蒸馏水定至50 mL，摇匀后离心，上清液即为待测酶液。
（3）POD活性测定：取20mL具塞试管6支，3支测定（3个重复），3支空白对照。各加入酶液1.0 mL,0.1%愈创木酚1.0 mL，蒸馏水6.9 mL，摇匀，加入0.18% H202 1.0 mL(空白管不加，多加1.0mL蒸馏水），摇匀（计时），25℃下准确反应10 min,加5%偏磷酸0.2 mL终止反应。用标准曲线1号管调零，于分光光度计上测定3支测定管和空白对照管的A470。
计算公式
式中，X为测定管四邻甲氧基苯酚的含量（mg)；X0为对照四邻甲氧基苯酚的含量（μg)；Vt为酶液总体积(mL);FW为样品鲜重（g)；Vs为测定时取酶液的量（mL)；t为酶作用的时间（min)。
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