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碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)
点击次数: 140发布时间:2020/11/23 11:28:40
- 上 传 者: 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间: 2020/11/23 11:28:40
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- 所属分类: 其它资料
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资料简介: 产品:碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 简介: 现用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物,经酶水解释放出磷酸,立即被钙离子沉淀为磷酸钙,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。 自备材料: 操作步骤(仅供参考): 染色结果: 阴性对照:(可选) 注意事项:
产品分类:酶类染色
储存条件:4℃,避光,3个月
规格:3×50ml
产品信息:碱性磷酸酶染色
注意事项:属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。
1、 蒸馏水
2、温箱或水浴锅
(一)石蜡切片染色
1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2、切片入 ALP 孵育液中,37°孵育2~12h。
3、流水洗 2min, 入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中,37°孵育5min。
5、流水洗 5min, 入蒸馏水。
6、在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。
7、流水洗 10min, 入蒸馏水。
8、(可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。
9、石蜡切片常规脱水、透明,树胶封片。
(二)冰冻切片染色
1、冰冻切片在丙酮氯-仿等量混合液内,4℃固定2-5min。
2、切片入ACP孵育液,置于37℃孵育5-15min。
3、流水洗 2min, 入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中,37°孵育5min。
5、流水冲洗5min, 入蒸馏水。
6、在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍,即为ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育1-2min。
7、流水洗 10min, 入蒸馏水。
8、(可选)核固红复染细胞核,蒸馏水洗。甘油明胶封片。
酶活性补位:黑素硫化铅沉淀
细胞核:根据复染液不同而不同
1、ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液,其余同上。结果为阴性。
2、(备选方案)切片进入ALP孵育液之前,可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3min,充分水洗后再进行孵育等步骤,可用此法做阴性对照。
1、ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最-好分成小分储存。一经开启立即使用。
2、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
3、对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
4、样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。
5、组织固定需在4°冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。
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