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琼脂糖核酸电泳标准实验步骤
点击次数： 179发布时间：2020/5/18 10:25:20
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2020/5/18 10:25:20
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- 文件类型： docx
- 所属分类： 其它资料
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资料简介： 1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子； 2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）； 3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固； 4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内； 5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去； 6.在DNA样品中加入10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内； 7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。一般60～100V电压，电泳20～40min即可； 8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳； 9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的zui佳分辨范围 琼脂糖凝胶浓度 线形DNA的zui佳分辨范围（bp） 0.5% 1,000～30,000 0.7% 800～12,000 1.0% 500～10,000 1.2% 400～7,000 1.5% 200～3,000 2.0% 50～2,000
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