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人黏着斑激酶(FAK)ELISA试剂盒注意事项
点击次数： 157发布时间：2019/7/11 11:58:07
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2019/7/11 11:58:07
- 文件大小： 64KB
- 文件类型： jpg
- 所属分类： 其它资料
- 下载次数： 52次
- 查看次数： 157
资料简介： 产品名称：人黏着斑激酶(FAK)elisa试剂盒 操作步骤：
英文名称：Gelling spot kinase(FAK)ELISA kit
供应商:古朵生物
产品规格：96T/48T
保存温度：2-8℃低温保存
用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断
运输：快递(根据客户要求，选择具体的运输方式)
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人黏着斑激酶(FAK)水平。用纯化的人黏着斑激酶(FAK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入黏着斑激酶(FAK)，再与HRP标记的黏着斑激酶(FAK)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的黏着斑激酶(FAK)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人黏着斑激酶(FAK)浓度。
注意事项：
（1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
（2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
（3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
（4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
（5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
（6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
样品收集、处理及保存方法：
（1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
（2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
（3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
（4）组织匀浆：将组织加入适量生li盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
（5）保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为12ng/ml，8ng/ml ，4ng/ml，2ng/ml，1ng/ml）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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