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人糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒实验步骤
点击次数： 135发布时间：2019/5/16 11:04:45
- 上 传 者： 上海古朵生物科技有限公司
- 上传时间： 2019/5/16 11:04:45
- 文件大小： 137KB
- 文件类型： jpg
- 所属分类： 其它资料
- 下载次数： 74次
- 查看次数： 135
资料简介： 中文名称：人糖蛋白130(gp130)elisa试剂盒
英文名称：Human glucoprotein 130，gp130 ELISA Kit
供应商:古朵生物
规格：96T/48T
性状：液体
存储：4℃保存6个月
运输方式：快递发货
检测标本：血清，血浆，尿液，胸腹水，脑脊液，细胞培养上清，组织匀浆等
检测方法：双抗夹心法
简述：gp130solublefragment。白介素6功能性受体复合物的信号传导亚单位。
安全性：该试剂对操作者和环境安全无害无传染性。
经济性：该试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本，市场价格合理。
应用领域：用于生物化学、分子生物学、细胞生物学、免疫学等生物实验需求，不用于临床诊断。
样品的收集、处理及保存方法：
1、血清→操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆→EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液→1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆→将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、保存→如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
操作步骤：
1.实验之前准备好所有的标准品（见备用试剂）。建议所有的标准和样本都做复孔。
2.首先把微孔板固定在支架上，分别设好相应的孔（空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔），然后在包被板上，标准品和代测样本孔准确加样50μl
3.加10 μL的生物素到代测样本孔中。（标准孔不加）
4.每孔加入酶标试剂50μl，混合，混合在这一步是很重要的。封板后置37℃温育1个小时。
5.在温育结束前15分钟内准备显色液。（见备用试剂）
6.用下面的一种方法洗板;
7.手洗：将微孔板中的混合物倒入合适的废物器皿中，然后每孔注满稀释好的洗涤液，再到掉，如此重复4次，然后倒置微孔板，将其拍到吸水纸上或者纸巾上，直到拍干。、
（注：洗板的时候要紧握微孔板的两侧，以确保所有的板条不脱落）
8.机洗：吸干所有的孔，然后用洗板机洗板5次，调整洗板机尽可能洗掉所有的液体，设置填充量在350微升/孔/清洗（范围：350-400微升），洗板后，倒置微孔板，将其拍到吸水纸上或者纸巾上，直到拍干。建议洗板机设置的浸泡时间为10秒，震动时间为5秒。
9.每孔依次加入显色剂A 50μl，显色剂B 50μl，封板后置20-25°C显色15分钟.
10.每孔加终止液50μl混合
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