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做实验应该选择原代细胞还是细胞株？
点击次数：2983 发布时间：2022/5/5 10:33:46
原代细胞：从体内直接分离的细胞。功能、代谢、形态类似体内细胞的特点，因此原代细胞适用于分析单个细胞形态、代谢、功能。原代细胞的缺点是：细胞均一性差，因为从特定组织取下来的原代细胞可能处于不同的发育时期。增殖能力差、培养时间受限、转染效率低。
细胞株：原代细胞经过长-期培养和筛选后，功能、代谢、形态趋于均一化的无限增殖细胞。适用于整体水平实验。优点是：容易培养、好感染、干扰因素少、便于同步化、实验好操作。缺点是：与整体差别大、可能丧失原代细胞的特性，细胞株在长-期传代过程中遗传物质发生变异。所以同一个学名的细胞株，有可能有完-全不同的形态、代谢、功能表现。不同代数的细胞株，性质也可能完-全不同。
原代细胞由于转染效率低这个问题，应用受到了限制。自从腺病毒诞生后，因为其超强的感染能力，克服了原代细胞难感染的问题，使得原代细胞的使用变得更加简单。由于细胞实验后，很多时候需要做到动物体内，由于原代细胞有体内细胞的特点，为了细胞实验和动物体内实验的结果更加趋向一致性，因此用原代细胞来进行细胞实验更值得考虑。
稳定细胞株构建
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长-期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的，由一个细胞扩增得到的细胞株。单克隆细胞株性状统一，传代过程中细胞的基因表达保持稳定。
用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
