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技术文章
复苏细胞不贴壁问题解决
点击次数：3850 发布时间：2024/7/4 10:29:29
细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反即刻恢复。细胞复苏过程升温要快，原则是慢冻快融，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。
复苏细胞是否贴壁跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。
细胞不好贴壁，建议您尝试以下6点：
1.复苏后洗涤一下,毕竟DMSO影响细胞的生长。
2./好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,效果应该还可以，或者涂fibronectin/collagen/BSA，也可以帮助细胞贴附
3.查看冻存的细胞是否是完/全死了,如果是的话是不可能贴壁的,因此在复苏后建议用台盼兰染色看一下死细胞和活细胞的数目及比例。
4.换液时间延长，尽量不要用力摇动。
5.尽量缩短复苏时间
6.操作的环境温度/好不要变动太多。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
