过氧化氢试剂盒

过氧化氢试剂盒测定意义：

H₂O₂是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H₂O₂不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H₂O₂可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H₂O₂也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。

过氧化氢试剂盒测定原理：
H₂O₂与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮 100mL、浓盐酸 5mL、研钵和冰。

过氧化氢试剂盒试剂的组成和配制：

试剂一：丙酮 100mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存；

(溶解时间较长，约 30min，务必提前准备)试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

H₂O₂提取：1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴

个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1mL；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；转移至EP管中，用试剂一定容至 1mL，8000g 4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

过氧化氢试剂盒测定步骤1、
分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂二、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

3、 在 EP 管中按顺序加入下列试剂

加入试剂四溶解沉淀后，室温静置5min，取200μ L转移至微量石英比色皿或96孔板中测定415nm处吸光值 A。对照管只要做一次即可。计算 A＝A 测定-A 对照。

注意事项：1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。