多酚氧化酶试剂盒

多酚氧化酶试剂盒测定意义：

PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

多酚氧化酶试剂盒测定原理：

PPO 能够催化邻苯二酚产生醌，后者在 525nm有特征光吸收。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

多酚氧化酶试剂盒试剂组成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：10mL×1 瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃ 离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）或果汁样本的处理：

按照血清（浆）或果汁体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）或果汁加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

多酚氧化酶试剂盒测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）

充分混匀，10000g，常温离心10min，收集上清，取200μ L至微量石英比色皿或96孔板中，525nm处检测测定管和对照管吸光度，计算 A=A测定-A对照。

多酚氧化酶试剂盒

注意：每个测定管需要设一个对照管。可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 1min 沸水浴处理。