半胱氨酸含量测定试剂盒

半胱氨酸含量测定试剂盒产品内容：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前 1 天，向试剂三中加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解，再加磷酸 0.625mL，

混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 10mL 蒸馏水，4℃可保存 2 周。标准品：液体×1 瓶，1μ mol/mL 标准液，4℃保存。

半胱氨酸含量测定试剂盒产品说明：

蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中，Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过 600nm 吸光度，计算 Cys 含量。

试验中所需的仪器和试剂：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、磷酸和蒸馏水。

半胱氨酸含量测定试剂盒操作步骤：

一、半胱氨酸提取 ：

1、液体样品中半胱氨酸提取：取 0.1mL 液体样品，加试剂一 0.9mL，充分混匀，11000 rpm 4℃离

心 10min，取上清液，待测。

2、 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g

组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，11000 rpm 4℃离心 10 min，取上清液待测。

3、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；11000rpm，4℃离心 10min，

取上清，置冰上待测。

二、测定操作：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 600nm，蒸馏水调零。

2、空白管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 20μ L 蒸馏水，100μ L 试剂二，100μ L 试剂三，混匀后室温静

置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 空白管。

3、标准管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 20 μ L 标准液，100μ L 试剂二，100μ L 试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 标准管。

4、测定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 20 μ L 上清液，100μ L 试剂二，100μ L 试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 测定管。