硝酸还原酶试剂盒

硝酸还原酶试剂盒 微量法测定意义

NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

硝酸还原酶试剂盒 微量法测定原理

NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ+NADH+H^＋→ NO₂ˉ+NAD^＋+H₂O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α -萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

硝酸还原酶试剂盒 微量法需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制诱导剂储备液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。试剂二：液体 5mL×1 瓶，-20℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60度水浴溶解后使用）；试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：标准储备液 1mL，-20℃保存。

诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充

分混匀。

0.1umol/mL 的标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取0.1ml试剂五加9.9mL蒸馏水，充分混匀。

硝酸还原酶试剂盒 微量法样品测定的前处理

1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。（根据需要进行诱导处理）

2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

硝酸还原酶试剂盒 微量法测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管或96孔板中加入下列试剂）

混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）反应30min

注意：标准管和空白管只需测一次，每个测定管设一个对照管。