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MycoQSearch™ 支原体qPCR检测试剂盒(EP)
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详细内容
中文名称:MycoQSearch™ 支原体qPCR检测试剂盒(EP)
英文名称:MycoQsearch™ Mycoplasma qPCR Detection kit (EP)
品牌:Cellsafe
货号:QDEP-100
规格:100次/盒
用途:本试剂盒采用高灵敏度qPCR 技术,用于生物制品的项目申报、方法学验证、放行检测中支原体qPCR检测。本品可作为传统培养法的替代方案,符合欧洲药典EP、日本药典JP 、美国FDA、韩国食品药品安全部MFDS的要求。
货号 | 品名(EP欧洲药典) | 规格 | 价格 |
QDEP-100 | MycoQSearch™ 支原体qPCR检测试剂盒(EP) MycoQsearch™ Mycoplasma qPCR Detection kit (EP) | 100次/盒 | 询价 |
一、产品原理:
MycoQSearch™支原体qPCR检测试剂盒采用探针法实时荧光PCR(qPCR),用于检测细胞培养物中的支原体污染。试剂盒包含引物探针混合液;FAM标记探针特异性识别支原体物种,HEX标记探针用于检测内对照DNA。
引物针对支原体基因组高度保守的16S rRNA编码区设计,可检出107种污染支原体,包括细胞培养常见的:口腔支原体、猪鼻支原体、精氨酸支原体、发酵支原体、莱氏无胆甾原体、人型支原体、肺炎支原体、唾液支原体、柠檬螺原体、滑液支原体以及脲原体。本试剂盒不会扩增真核生物DNA以及其他细菌DNA。
二、产品特点:
1、符合欧洲药典EP、日本药典JP 、美国FDA、韩国食品药品安全部MFDS要求,用于生物制品的项目申报、方法验证、放行检测中支原体的qPCR检测;
2、本试剂盒采用FAM和HEX双通道检测体系,适配常见的荧光定量PCR仪;
3、高灵敏度:每个反应可以检测到1~10拷贝靶DNA,完全满足<10cfu/ml、<100GC/ml要求;;
4、特异性:通过特异性引物设计,有效避免与支原体亲缘关系较近的其他菌种发生交叉反应,从而降低假阳性风险。
5、本试剂盒配备了UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶)防污染体系。根据检测需要,可在qPCR反应前加入UDG酶,有效清除既往PCR反应中残留的含尿嘧啶扩增产物,降低扩增产物污染引起的假阳性风险。
6、检测时长:视qPCR仪器,总检测可控制在3小时以内。
三、试剂盒主要组分:
序号 | 管盖颜色 | 组分 | 用途 | 组分体积 |
1 | 蓝色 | qPCR预混液 qPCR Master Mix | qPCR扩增预混液,含dUTP | 1.5 mL |
2 | 琥珀色 | 引物和探针 Primer and Probe Mix | FAM/HEX引物探针混合液 | 200 µL |
3 | 紫色 | 管样品准备用内控对照 | 提取前加入,提取内对照IC(实验主要质控) | 2 mL |
4 | 橙色 | PCR反应用内控对照 Internal Amplification Control DNA | 内对照DNA原液 | 200 µL |
5 | 黄色 | 阳性对照 Positive Control DNA | 支原体阳性对照模板 | 50 µL |
6 | 琥珀色 | 50倍浓缩低ROX参比染料 (Low-ROX) 50倍浓缩高ROX参比染料 (High-ROX) | ABI仪器荧光归一化校正;其他平台不加ROX | 60 µL |
7 | 白色 | 无DNA酶的水 DNaseFree Water | 无酶水 | 1.2 mL |
四、标准实验流程要点(EP2.6.7)
1、取1 mL细胞培养液,15000 rpm离心10 min,沉淀支原体,弃上清;
2、核酸提取(以Qiagen QIAamp UCP Pathogen Mini Kit为例): 加入蛋白酶K的同时,加入20 µL紫色管IC内对照DNA,56℃裂解;后续按试剂盒完成提取,洗脱体积50µL;
3、qPCR总体系30µL;模板上样量5µL;
4、qPCR程序:
a.(选配UDG:增加37℃孵育步骤)
b.预变性:95 ℃,5 min
c.45循环:95 ℃,20 sec;60 ℃ 30 sec;72 ℃ 30 sec
5、荧光采集:FAM(支原体)、HEX/VIC(内对照IC)
五、结果判读
FAM(支原体) | HEX/VIC(提取内对照IC) | 判读结论 |
Ct<40 阳性 | 阳性 | 支原体阳性 |
Ct<40 阳性 | 阴性 | 支原体阳性 |
阴性 | 阳性 | 样品无支原体污染,实验有效 |
阴性 | 阴性 | PCR抑制或样品前处理失败,结果无效,需复测 |
六、ROX染料选型简表
1、High-ROX高ROX:ABI老机型:7000/7300/7900HT/StepOne系列
2、Low-ROX低ROX:ABI 7500、QuantStudio系列;Stratagene MX系列
3、No-ROX不加染料:Bio-Rad、Roche、Qiagen Rotor-Gene、Eppendorf等非ABI平台
七、关键注意点
1、反复冻融损伤试剂,频繁使用建议分装,-20℃保存;
2、推荐使用带滤芯枪头,设置独立核酸配制区,降低气溶胶污染;
3、本试剂盒内对照为提取阶段加入的IC(提取内对照),同时有IAC扩增内参,可以同时监控提取损失与PCR抑制,
4、UDG酶为外购试剂,试剂盒不包含,不用UDG则无dUTP-UNG防污染能力。
八、储运与有效期
运输与储存:-20℃
有效期:详见外包装失效日期
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