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技术文章
细胞培养中的污染监控与检测——细菌
点击次数：3770 发布时间：2022/3/3 14:44:24
细胞培养是生物医学研究的常见操作，其中避免细菌污染是重要一环。细胞是否干净，直接关系到实验结果稳定性的好坏。
一般情况下细胞实验过程中出现的常见污染主要有：细菌污染、真菌污染和支原体污染。每种情况又分别有不同的症状和解决方法。
我们将分三篇文章，简要概述三种不同污染的症状及处理方法。
一、细菌污染
细菌概述
细菌是一种原核细胞微生物，一般为微米别。细胞培养过程中常见的污染菌为大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌等。
细菌污染症状
与其他污染相比，细菌污染在细胞培养过程中“发病”更为迅速，较容易被发现。具体表现为：
- 细胞培养基短期内变黄且浑浊（大量酸性物质累积）
- 静置的培养液时不浑浊，但稍加震荡，就有许多浑浊物漂起
- 可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮
- 细胞停止生长并有中毒表现，后出现大量死亡
细菌污染鉴定
简易方法：
1、取少量培养液涂片染色检查，凭经验判断细菌种类。
2、向肉汤培养基内滴入少量培养液，37 ℃培养以检测。
业试剂盒检测：
以Minerva Biolabs公司的细菌PCR检测试剂盒为例（点击下方图片直达微信商城，了解更多详情）：
该试剂盒采用PCR方法，用于检测生物样品（包括细胞培养物和病毒贮存液）中是否存在细菌。根据序列分析，该试剂盒可检测超过45种细菌属，其中含污染细胞的常见菌属：
试剂盒包括
冻干混合物：含引物/核苷酸/内部扩增对照DNA /聚合酶
复溶缓冲液
冻干的阳性对照DNA
PCR水
样本处理
样本不用提DNA，只需热灭活（95 °C 5分钟）。样本需不含抗生素。如含抗生素，则细胞应在不含抗生素的培养基中再培养至少一代。
保质期
2-8℃可保存至少6个月。
冻干试剂溶解后，需在-18℃以下保存。
结果分析：
内控对照显示PCR反应正常，样本中无PCR抑制成分。460bp左右存在目的条带，提示存在细菌污染。
细菌污染的祛除
对于一般细胞：发生污染直接丢弃，并对环境进行消杀，紫外线灭菌、消毒液擦拭培养箱、工作台等。
对于重要且污染相对较轻的细胞：一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作冲击疗法，用药 24~48 小时后再换常规培养液，需要注意的是：
一旦发生污染后再使用抗生素常常难以根chu，有的抗生素只有抑菌作用而无杀菌效应。
且有研究表明，大量使用抗生素，或对细胞基因组产生影响。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
