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技术文章
如何高效清除细胞中的支原体污染？
点击次数：2707 发布时间：2025/1/24 9:49:16
在细胞培养过程中，支原体污染是一个常见且棘手的问题。支原体是一种介于细菌和病毒之间的原核生物，形态多样，没有细胞壁，且能够直接穿过常规的除菌滤膜，因此极易造成细胞培养污染。支原体污染不仅会影响细胞的正常生长和代谢，还可能改变细胞的基因表达，干扰实验结果，甚至导致实验失败。
一般情况下，细胞感染支原体后，建议直接丢弃并对环境进行消毒处理。然而，在某些特殊情况下，例如已转染或大量扩增的细胞，我们可能无法轻易丢弃这些辛苦培养的细胞。这时，细胞用支原体祛除试剂就派上了用场。
一、针对已发生支原体污染且不愿丢弃的细胞
**Zell Shield®细胞支原体祛除试剂（货号：13-0050/13-0150）**是一种理想的选择。它含有复合抗生素成分，可以抑制支原体蛋白和DNA合成，同时对细菌和真菌也有抑制作用。使用方法如下：
消化细胞：将培养瓶或培养皿中的细胞消化下来。
离心：将消化好的细胞连同培养液转移至离心管中，进行常规离心。
清洗细胞：弃去上清液后，用无菌PBS轻柔吹打清洗细胞。
重复清洗：将PBS和细胞的混合物进行低速离心，弃去上清液并重复清洗3次。
重新培养：一次清洗结束后，弃去PBS上清液，加入含有Zell Shield®细胞支原体祛除试剂的新鲜培养基进行培养。按照使用说明进行操作，培养4代后，细胞中的支原体即可被祛除。
二、针对无法培养的珍贵样本或病毒收获液
可以选择德国MB公司的Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂（货号: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000）。该试剂含有「治疗液」和「巩固防护液」。其中，「治疗液」来自枯草杆菌提取物，可特异性地与支原体膜结合，改变支原体膜通透性，从而使支原体在2-3小时内破溃死亡；「巩固防护液」加入培养基后，后续培养一个月，细胞将清除支原体污染，效果确切。
使用方法如下：
细胞重新传代：用含Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂、5%FBS的培养基替换原有培养基，对细胞进行培养。
孵育培养：培养2-3小时。
换液：对细胞进行换液。
后续培养：用不含Mynox®的正常培养基（原始培养条件）对细胞进行培养，传代3-4次。
检测与观察：可对细胞进行支原体检测，观察细胞状态。
三、针对可以培养超过一个月的珍贵细胞株
如果需要对这类细胞株进行祛除支原体的处理，可以使用德国MB公司的Mynox® Gold珍贵细胞株支原体清除试剂（货号：10-0201/ 10-0501/ 10-1001）。该试剂分为直接杀除和巩固防护两步处理，不仅能祛除支原体，还能在后续培养中巩固清除效果，防止支原体再次污染。
使用方法如下：
混合治疗液：将治疗液与含5%FBS的培养基混合。
添加至培养皿：将混合后的治疗液添加至培养皿中。
接种细胞：接种细胞。
培养至汇合：培养细胞至80%-90%汇合后，进行传代。
加入巩固液：传代的同时加入巩固液。
重复操作：重复步骤4、5次。
后续传代：在无Mynox® Gold的情况下传代。
检测：用Venor® Gem支原体检测试剂盒检测。
通过这些方法，可以在不同情况下有效祛除细胞中的支原体污染，保护珍贵的细胞样本，确保细胞培养的正常进行和实验结果的可靠性。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
