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技术文章
支原体检测试剂盒qPCR Kit (经典法)的操作步骤
点击次数：2790 发布时间：2024/12/6 9:09:42
支原体qPCR法介绍：
荧光定量PCR法（qPCR）：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。
优点：
①灵敏度高、特异性强。
②时间短，2-3小时出结果
③检测结果可定量
④操作简便
缺点：
①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在专业人员指导下使用。
操作步骤
第1步：样本处理
a.细胞培养上清
b. 生物药或需遵循药典的样本
说明：①样品基质可能会影响检测的灵敏度。收集和筛选更高的样品量可提高测定灵敏度。
②细胞培养物样本含丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原DNA，影响检测灵敏度。
建议：样本做DNA抽提处理，实现灵敏度。
：德国MB公司生产的专用支原体DNA提取试剂盒
Venor? Gem Sample Preparation Kit
该DNA抽提试剂盒已经过广泛验证。
第2步：试剂制备
a.冻干粉溶解
b. 反应体系制备
b1) 样品为细胞上清筛查——反应体系制备
b2) 样品为生物药——反应体系制备
第3步：启动荧光定量PCR仪
第4步：结果判别
FAM通道：检测支原体荧光信号。HEX通道：检测内控对照荧光信号。
支原体DNA和内控DNA存在信号的竞争性抑制。
支原体DNA越多，FAM通道信号越高，检测内控对照的HEX通道信号越低。
定量需基于Ct值和DNA标准曲线。
Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。
劲爆褔利 德国MB 25周 年 庆典 10CFU? 支原体检测限标准品促 销价4980元
英文品名：10 CFU? Mycoplasma Sensitivity Standards
中文品名：10CFU? 支原体检测限标准品
10CFU? 支原体检测限标准品适用范围:
符合《美国药典》、《欧洲药典》和《日本药典》的方法学验证要求，标准化的10CFU灵敏度标准品，可用于验证基于NAT的支原体检测的稳健性和灵敏度，特别是支原体检测的方法学验证。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
