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技术文章
支原体实验室检测方法大PK
点击次数：3855 发布时间：2021/9/28 10:07:44
对于在实验室的工作学习的同学们而言，这些方法基本可以判断自己养的细胞是否被支原体污染，但有些时候，需要更精zhun的数据来证明污染。
随便上网一搜，好家伙这检测方法还真不少。好几种挑来挑去都挑花了眼，仿佛「大型选秀现场」我们就来评判一下，现有的支原体检测方法，到底谁才能C位出道。我们将从业务能力、突出优势、缺点不足四个方面对每位选手进行评判。
1号-支原体培养法
这位选手可以开始自我介绍了。
我叫支原体培养法，通过用的培养基对待检样品中的支原体进行分离鉴定，简单来讲，就是把细胞培养液或者细胞悬浮液接种到培养基，在一定条件下培养，观察是否有支原体菌落出现，有点像荷包蛋，但也不是所有的支原体菌落都是荷包蛋样的，也有圆形的
说说你的优势是什么？
我的灵敏度很高，而且是《中国药典》认同的方法。
但是菌落培养应该需要很长时间吧？
是的，分离培养过程中长出明显克隆需要7—29天，时间比较长，操作也比较复杂。
而且你还有一个明显的缺点，不是所有的支原体都能人工培养出来的，所以有一些你是检测不出来的。
2号-支原体DNA染色法
请介绍一下你自己。
我叫支原体DNA染色法，通过把样品接种到指示细胞中，就比如Vero细胞之类的，经过培养之后，用特异性荧光染料（比如Hoechst染料）对支原体DNA进行染色，顺便说一句，我也是药典推荐的方法。
OK，那你有什么特长？
跟1号选手相比，我普适性更强，适用于一些不易培养的支原体，操作也更简单。
那缺点呢？
鉴定时间稍稍有些长，大概要4—14天，也有假阳性、假阴性的可能，需要在细胞污染比较严重的时候才能检测出来。
3号-支原体ELISA法
3号选手来介绍一下你自己吧。
我可是这几种方法里考验操作者技术的一种。用支原体特异性抗体来检测相应的支原体。
对操作者技术要求高可不见得是什么优势，实验室操作人员都需要，用简单但可kao性又很高的方法来进行检测。而且，我觉得你很依赖抗体，不够广谱，对于没有抗体的支原体你就没有办法处理了，而且稍不留意就容易出现实验误差。
但是我的特异性很高，时间也比较短，3-5小时就可以出结果了。
4号-PCR组合
你们俩是必须一起合作，还是可以独立工作呢？
我们俩是一对兄弟，各自的业务能力都很强，无论是谁均可以独立完成支原体检测的工作。
哦？那分别做一下自我介绍吧，哥哥常规PCR先来吧。
我会根据支原体核糖体16s—23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过分析对比扩增产物的大小来做出诊断。
那你跟其他几位比有什么优势呢？
我的灵敏度高、特异性好；耗时短，2—3小时出结果；符合欧洲药典；重点是操作简便。
那弟弟再来介绍一下自己吧。
我期的工作跟哥哥一样，后续我可以将「针对支原体特异性保守序列探针」做荧光标记，使扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件进行DNA扩增反应的实时监控。也就是说，我比哥哥多了一个相对量化的功能（就比如A样品是B样品的2倍这样）。
但我觉得你们俩都两个缺点：不能判断灭活处理后的样品是否还有活的支原体，因为支原体DNA一直都在也就是说，没办法判断支原体灭活效果，会出现假阳性，而且你们鉴别支原体的能力，比较依赖试剂的质量，不知道试剂的效果如何呢？
其实我们可以联合其他选手成团合作，这样准确率更高；关于质量方面也无需担心，我们来自以严谨著称的德国，是生物试剂公司MB开发的业支原体检测试剂盒，支原体和军团菌技术和产品的开发在上遥yao先。
经过一番激烈激烈的角逐，我们对各种检测方式也有了更清晰的认识：
培养法是jin标准，但是周期长，有些支原体还检测不到；
染色法普适性强，操作简单，但是对于支原体数量有要求，也容易有假阳性假阴性；
ELISA法耗时短，但是对操作人员要求比较高；
PCR的方法基本包含了上面所有的优点，除了不能分辨支原体的死活。属于这些方法里综合能力强，性价比zui高的了
综合评判，我们决定把C位颁给PCR检测法！
恭喜PCR法夺冠
但是市面上支原体PCR检测试剂盒质量参差不齐，大家在选的时候要注意品牌以及消费者口碑，选择靠谱的产品。德国Minerva Biolabs公司的试剂盒就是一个不错的选择。
MB公司1999年在德国柏林成立，独立于德国的Robert-Koch Institute，业生产微生物污染检测、预防和清除产品。qPCR检测试剂盒节省时间、灵敏度高、特异性高，为科研工作者带来便利。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
