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技术文章
DIY判断细胞的支原体污染
点击次数：3862 发布时间：2021/9/27 9:18:39
在细胞培养过程中，病原污染可以算得上是科研工作者的噩梦了。其中支原体污染更像是一个无形的杀手，时刻威胁着细胞的安全。 细菌真菌污染还有迹可循，起码显微镜下能够清晰地看到，但是支原体个子小，不易观察，由于繁殖速度比较慢，期感染几乎没有症状。经常稍不留意，就中了支原体的「阴招」。统计显示，全球大约有60%左右的细胞培养存在或曾经存在过支原体污染。 那到底如何判断细胞究竟有没有感染支原体？我们就来从原理上深扒一下，网传的肉眼判断是否感染支原体大法到底正不正确！ 症状1：细胞生长缓慢甚至死亡？ 被广泛使用的细胞培养基，不仅给细胞提供支持和养分，对于支原体而言，也是天堂一般的存在。 适宜的温度（37℃） 合适的PH（7-8之间都可生存） 充足的养分（各种氨基酸、生长因子等） 一定的二氧化碳（5%左右） 与细胞培养高度重合的培养条件，注定了支原体要与细胞共同竞争有限的生存资源。 早有研究表明[1]，一些支原体（包括为常见的人型支原体、发酵支原体、精氨酸支原体等），通过精氨酸脱亚胺酶分解精氨酸来供能。当这些支原体混入细胞培养体系后，会与细胞争精氨酸，导致细胞「吃不饱饭」，出现营养不良的症状：生长速率异常、活力下降、易脱壁等等。 支原体感染症状2：细胞变形、碎片增加、易聚团、有小黑点？ 经过支原体的这一番操作，细胞结构已经被严重破坏，随之而来的就是细胞形态改变、细胞易聚团、大面积细胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培养基中的碎片和小黑点） 支原体感染症状3：培养基易变黄？ 支原体也是如此——当培养体系中感染了支原体并大量繁殖的时候，会向外排放代谢产物，影响体系中的PH，加快培养基变黄的速度。 综上所述，如果你培养的细胞出现以下情况，基本可以确定是支原体感染了，不放心的话可以再配合支原体检测试剂（检测神器帮你揪出培养基中的支原体！）进一步确认。 细胞被支原体污染后的表现 ①细胞生长缓慢 ②细胞变形 ③培养基中碎片增加 ④细胞易聚团 ⑤镜下观察有小黑点 ⑥培养基提变色 除了影响细胞活力，支原体还会给细胞带来的几百种基因表达的改变,包括编码受体、离子通道、生长因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白，可以锚定在胞膜的外表面，被TLR2等免疫细胞的受体识别。激活NF-kB途径，进一步导致细胞活化[5]，偏离终的实验结果。 细胞培养小课堂到这里就结束了，希望可以帮你解决实验上的一些疑惑！
而精氨酸又是细胞组蛋白的重要组成成分，缺乏精氨酸会严重影响组蛋白合成，引起染色体断裂。再加上细胞处于长qi饥饿的状态，终导致细胞生长变慢甚至死亡。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
