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技术文章
牛血清在细胞培养中如何操作及遇到的问题
点击次数：4184 发布时间：2021/1/28 9:32:53
牛血清在细胞培养基中的实验步骤
- 取HeLa细胞和Mel细胞（本来应该取正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，但是实验室条件有限，本组做HeLa细胞），胰酶消化后，用无血清培养基（事先加双抗）吹打成细胞悬液（避免以血清的干扰）。计数。
2.取4000个左右的HeLa细胞加入到每行的孔（在加之要震荡培养基）。本实验经计数后应加11μL细胞。
3.在A和H行中孔加入89μL含标准血清（2004.12）的培养基。（对照组）
4.在A和H行中每孔中加入100μL含标准血清的培养基。
5.将孔中的液体吸100μL至第二孔，从第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。*后的100μL弃掉。这样就形成了从个孔到*后个孔的细胞梯度从大约2056，1028等至1个。（要吹细均匀）
6.每个孔再补加100μL含标准血清的培养基。这可以保证孔中的营养物质。
7.在B行采取同样的方法。白介素elisa试剂盒不同的是用含有需筛选的批号为011217血清代替标准血清。
8.在C至G行采用同样的方法。
9.将96孔培养板放入CO2 培养箱37℃培养周。
10. 培养结束后，观察细胞生长的情况。比较在同细胞浓度下的不同学清对细胞生长的影响。在同细胞浓度下细胞生长数*多的培养基所含有的血清即可作为被选择的血清样品。
血清使用中的些问题
1）如何更换使用血清？
需要更换使用不同品牌或批次的血清之，需提对要使用的血清进行验证，可使用自己经常培养的细胞进行，保证该血清对细胞生长的促进作用。在更换使用时可以将要更换的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待细胞完全适应后进行更换。
2） 血清颜色的问题？
血清颜色主要是黄色或红色，般淡黄色或微红色为正常。这个主要受血红蛋白含量的影响，若颜色太深(接近培养基的颜色)，则有可能是采血过程中出现溶血导致的。
3）血清沉淀的问题?
血清中的沉淀主要是纤维蛋白凝集产生的，般来说每次冻融都会产生部分的沉淀，但不影响血清质量和使用。另外，血清在加入到培养基中后也是有可能会产生沉淀的，特别是灭活后的血清，会持续产生黑色颗粒，这可能会被错误判断为污染。般血清产生的沉淀在显微镜下观察为微小的不规则絮状或者颗粒物质，排查是否为污染好的办法是用琼脂板检测。
- 产品说明 :采用Ausbian进口特胎牛血清，透析过滤去除10000D以下小分子（如次黄嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子对细胞产生干扰。适合脉冲示踪实验（例如同位素标记特定小分子，并加入到培养体系中，以研究细胞代谢），也适合转染CHO后的筛选等应用。
- 描述
- 1. 精选内毒素更低批次，细胞更健康。
- 2．每个批次提供完整的检测报告。
- 3．全程冷链运输，不出现冻融现象，保证质量不受影响。
- 4．100毫升，500毫升多种包装选择，适合不同实验用量需求。
- 5．国内现货储备，避免国际货运风险。
- 储存条件 -20°C冻存。 胎牛血清次解冻后，应按单次习惯用量分装，分装后的血清仍-20°C冻存。 若置于4°C的血清，应在周内用完。 为保证细胞培养的佳效果，血清和培养基的配置，应遵循“现用现配”原则。配好的培养液，应于周内用完。 血清避免反复冻融，避免在4°C或更高温度储存过久，否则会破坏血清中有效活性成分，影响血清品质。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
