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技术文章
细胞被支原体污染后的清除办法
点击次数：4162 发布时间：2021/1/27 9:25:51
概述：在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是个性的难题。本文缔生物为您分析细胞被支原体污染后的清除策略。
细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等。
说起支原体污染，估计细胞培养的同学就开始犯愁了，细胞培养的老手都知道，支原体污染非常不易察觉。有的实验室被支原体污染后，如果不进行有效彻底的支原体清除，该实验的细胞培养很难进行下去，细胞传代3代以后状态就急剧下滑，无法进行正常实验，有的实验室甚至只能指望换细胞间。那么怎样才能有效检测并清除支原体污染呢?
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（些支原体在人体是正常菌群）、培养的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染；严格实验操作；细胞培养和器材要保证无菌；在细胞培养中加入适量的抗生素。
1、支原体检测
荧光定量PCR法（qPCR）：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。
优点：①灵敏度高、特异性强。
②时间短，2-3小时出结果。
③检测结果可定量。
④操作简便。
缺点：①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在业人员推荐指导下使用。
德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒（均为探针法检测），依据操作步骤的细微差别，
分『经典法』和『步法』两种。
2、环境空间消毒方案
试验台、超净台、培养箱、液氮罐、移液器、门把手、电话等细胞培养环境
被支原体污染，可引起细胞的污染。应定期对工作区域进行消毒。
德国MB生产的Mycoplasma-offTM喷雾剂，或湿巾擦拭 5-10分钟清除，对支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子祛除确切有效。无残留, 无腐蚀, 无致癌性，操作简单方便。
qPCR法介绍：
荧光定量PCR法（qPCR）：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。
优点：①灵敏度高、特异性强。
②时间短，2-3小时出结果。
③检测结果可定量。
④操作简便。
缺点：①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。（可用培养法做补充验证）
②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大（由于引物及内在设计不同），需谨慎选择，尽量在业人员推荐指导下使用。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
