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技术文章
告诉您细胞中支原体的祛除方法
点击次数：4195 发布时间：2021/1/19 8:59:52
培养的细胞被支原体污染后，几乎可以改变细胞的所有功能，其可以导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着，影响病毒的扩增能力和产量等等。例如，Miller CJ等人通过Microarray的研究表明：支原体污染严重改变被污染细胞的基因表达谱 [1, 2]，支原体污染后与无污染的同细胞系相比，表达差异达2倍以上的基因就有200多个！！！（详细数据请见参考文献 1）。Edward Burnett 和 Liz Penn认为：被支原体污染的细胞系已经不是原来的细胞系，而是另外个细胞系了 [3]！此外，严重的支原体污染将彻底摧毁株细胞系。
支原体污染会影响细胞生长,状态变差。部分细胞有支原体污染后仍能正常生长，细胞与支原体长期共存，但不明显的支原体污染也会对细胞实验结果产生影响，出现实验结果难以理解，重复性差等问题。
、
Zell Shield®支原体祛除剂（培养基用）
英文名：Zell Shield®
品牌：德国MB
用途和用法：
1. 适用范围
（1）细胞已发生支原体污染，但又不愿丢弃，希望继续培养（如已转染或大量扩增的细胞）。
（2）初始培养的原代细胞。
（3）存在支原体污染高风险的细胞。
2. 用法：
（1）1:100加入培养基。
（2）当细胞存在支原体污染时，应先对细胞悬浮冲洗三次，再用含Zell Shield®培养基培养。每次传代都应做悬浮冲洗处理。连续传代4次，支原体即可祛除。
二、
Mynox® Gold支原体祛除剂
（珍贵细胞保种用）
英文名：Mynox® Gold
品牌：德国MB
1. 适用范围
被支原体污染的珍贵细胞或不易获得的生物样本（如细胞种子）。
2. 用法：
步骤1. 将「次治疗液」加入到4.5ml培养基（FBS需≤5%）中，培养细胞（细胞数为104~105）。
步骤2. 细胞长至80%-90%汇合时，细胞传代。将1管「巩固防护液」加到9.5ml培养基中，用该培养基继续培养。
步骤3. 重复步骤2，细胞再传代2次，支原体即完全祛除。
注意：每次传代时，好都能把细胞悬浮冲洗三次，可取得更好的治疗效果。
三、
Mynox支原体祛除剂
（珍贵样本用）
英文名：Mynox®
品牌：德国MB
1. 适用范围
被支原体污染的珍贵细胞、不易获得的生物样本或病毒收获液（特别是不能长期培养的样品）。
2. 用法：
（1）对于贴壁细胞：
步骤1. 培养皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培养基中（FBS≤5%），混匀。
步骤2. 再加入2ml细胞（细胞数为104~105，培养基中的FBS需≤5%）。
步骤3. 细胞培养2小时，弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。
（2）对于悬浮细胞：
步骤1. 在离心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混匀。
步骤2. 加入1.6ml细胞（细胞数为104~105）。
步骤3. 室温静置30min。
步骤4. 600×g离心5min。弃上清，换用新鲜培养基培养4代即可。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
