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技术文章
慢病毒载体从哪里来
点击次数：3941 发布时间：2020/12/3 15:13:47
病毒不是光对人有害，也有对人有益的、被人改造而为人类造福的，如慢病毒。它可携带基因，因此又被称为慢病毒载体
慢病毒载体具有可感染分裂细胞及非分裂细胞，转移基因片段容量较大，目的基因表达时间较长，不易引发宿主免疫反应等诸多优点。因此，慢病毒载体已成为基因治疗中载体研究的热点。
慢病毒能使携带的基因整合至宿主细胞的基因组内，且能利用病毒携带的调控元件，使目的基因随宿主细胞特异性表达。
目前，慢病毒载体还在不断的改进，使得它在生物安全性上不断提高，
感染效率不断增进。293T，慢病毒载体的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为含10%胎牛血清（FBS）的DMEM 高糖培养基。放于37℃，5% CO2
细胞培养箱中培养。
转染前48 h，用胰蛋白酶消化生长状态良好的 293T 细胞，利用含10%胎牛血清的DMEM 高糖培养基，6×105 细胞/10 mL，种植于10 cm 细胞培养皿，37℃、5% CO2 培养箱内培养。待细胞密度达70%～80%时即可用于转染。良好的细胞状态对于病毒的包装有更好的效果。
要尽量保证细胞传代次数在10 代以内。转染前2 h，将细胞培养基更换为无血清无抗生素的培养基。
收集转染后48 h（转染时间即可为 0 计起）的293T 细胞上清液（72h的也可收集）。以0.45 μm滤器过滤上清液于50 mL无菌无酶离心管中，病毒在4℃可以保存几天，但要长期保存，应在-20℃或-80℃保存。
可见，慢病毒的生产离不开宿主细胞（如293T细胞）的良好状态。高品质的胎牛血清则是293T细胞生长的必要保证。
下面介绍质量和服务较好的胎牛血清应具备的要素：
1. 精选内毒素更低批次（≤3EU/ml）。
2. 新批次在试用前，提供试用服务。
3. 每个批次产量充足，如在800-2000升，试用满意后，批号可先锁定，避免反复更换批次，保证数据稳定。
4. 多批次平行供应，也可多种选择。
5. 具有完整的检测报告，为项目申报提供支持。
6. 血清全程冷链运输，确保无反复冻融。
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原创作者：北京缔一生物科技有限公司
