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技术文章
支原体qPCR检测的结果诠释
点击次数：4056 发布时间：2020/11/27 12:17:49
支原体qPCR检测不仅用于细胞培养的支原体筛查，也用于生物制品行业的放行检测，但前提是要有方法验证。
无论是否遵循药典，支原体qPCR检测的结果判定都需要一定的标准。下面小编结合德国MB厂家的支原体qPCR说明书及相关文件，给予进一步的阐释。下面小编结合德国MB厂家的支原体qPCR说明书及相关文件，给予进一步的阐释。
一、荧光检测通道的结果诠释
用MB公司的qPCR试剂盒检测时，qPCR仪的FAM通道检测支原体荧光信号，HEX通道检测内控对照（简称IC）的荧光信号（如没有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于监测qPCR反应是否正常。对于这两个通道，Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。支原体DNA和IC存在信号的竞争性抑制。
在阴性对照和阳性对照均结果正常的前提下，
根据FAMTM通道和HEX通道的检测结果，可判别样品是否有支原体污染。
具体见下表：
表1. FAM™通道 (支原体) 和HEX™ (IC) 通道的结果诠释
需要说明的是：
内控对照可在支原体DNA抽提时加入。如果结果无效，则说明抽提失败，或者qPCR存在抑制。
如果内控对照是在qPCR反应时加入，则说明qPCR存在抑制。
二、对照与样品的结果诠释（适用于符合EP/JP的检测）
对于遵循EP/JP的检测，具体数据诠释见表2。
表2.
表2结果判定的前提是：qPCR检测试剂盒符合EP/JP的要求。
三、MB公司支原体qPCR应选择质量较好，符合国际药典要求的试剂盒，如德国MB公司的支原体qPCR检测试剂盒(经典法)(英文名：Venor®Gem qEP)经过厂家全面的方法验证，符合欧洲药典/日本药典要求，
适合细胞治疗，CAR-T，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。
需注意样本要先做DNA抽提，再进行qPCR检测。
MB还提供用于PCR/qPCR方法验证的配套的支原体10CFU、100CFU菌株标准品、特异性验证用支原体基因组DNA和细菌基因组DNA、支原体DNA绝对定量标准品（基因组拷贝数经严格标定）。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
