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技术文章
PCR最低检出限刍议
点击次数：4240 发布时间：2020/11/17 11:13:46
现在，PCR试剂盒常用于各种检测。其中最di检出限是PCR试剂盒一个重要的参数。PCR最di检出限就是所能检测到的靶标的最di值。最di检出限的确定应通过定量标准品来完成。定量标准品一般是经过严格标定拷贝数的阳性DNA，梯度稀释后进行一系列的检测，每个梯度做8个复孔，最终确定条带能否观测到或确定Ct值。
示例. PCR定量标准品（支原体）（Minerva Biolabs）
接着可用Reed-Muench公式计算方法的检测限（LOD50），lgLOD50=距离比例×稀释对数质检的差+高于50%检出率的稀释度的对数。距离比例=（高于50%检出率的百分数-50%）/（高于50%检出率的百分数-低于50%检出率的百分数）。也可使用Excel软件在回归分析中，自动计算LOD值（Data>Data Analysis>Regression，选中X，Y值）
PCR最低检出限相当于方法的灵敏度，它与DNA模板的质量（包括是否有杂质）、整个PCR反应体系的性能优化（包括反应缓冲液、酶的功能、引物序列、引物浓度）、PCR程序条件的设定都有关系。有人采用巢式PCR，的确使得方法的灵敏度更高，但同时也增加了反应的复杂性和反应时间。
总之，PCR具有足够低的检测限，才能保证不会发生漏检。因此，在方法学意义上，最低检测限应受到足够的重视。
参考文献：
- Armbruster, D.A., Pry T. Limit of blank, limit of detection ａnd limit of quantitation. Clin. Biochem. Rev. 29, Suppl 1 (2008).
- Ripp, J., Analytical Detection Limit Guidance & Laboratory Guide for Determining Method Detection Limits, Wisconsin Department of Natural Resources, Laboratory Certification Program, 1996. https://books.google.co.in/books?id=7WtjHQAACAAJ.
- Shrivastava, A., Gupta, V. Methods for the determination of limit of detection ａnd limit of quantitation of the analytical methods. Chronicles Young Sci. 2, 1 (2011). doi:10.4103/2229-5186.79345.
- Desimoni, E., Brunetti, B. About Estimating the Limit of Detection by the Signal to Noise Approach. Pharm. Anal. Acta. 6, 4 (2015). doi:10.4172/2153-2435.1000355.
感谢缔一生物提供相关内容。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
