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技术文章
对血清反复冻融有害吗
点击次数：4252 发布时间：2020/7/21 13:05:25
你是否遇到过实验一次用不完的血清冻融后等待下次接着使用的情况呢？冻融血清会对蛋白的活性有影响，如果是反复冻融的确会影响到细胞正常生长。
曾有研究发现，血清冻融三次，对肿瘤标志物的浓度影响不大1，对于血浆，有报道在短时间内反复冻融三次，对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大，但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。最重要的是一篇西北民族学院的文章，《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》，作者针对SP2/0细胞，用MEM培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线，根据公式t =T/A , A=log2
Y/X计算细胞倍增时间（t 为细胞倍增时间， Y 为细胞峰值前1 d 的细胞数， X 为接种细胞数， T 为细胞生长时间）。结果显示：选用的三批新生牛血清在反复冻融 28 次时， 血清促细胞生长的最大增殖量变化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融 20次时延长， 即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到 20 次时显著增加。笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。可见，影响还是比较显著的。该文章的局限是针对新生牛血清，而没有对胎牛血清进行测试。
国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。3
总而言之，如果能避免牛血清的反复冻融，及时分装，那是最理想的。如果在短时间内有几次反复冻融，也不必过于担心。但是，对于胎牛血清，还有一个问题，是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时，冰块和蛋白融化的速度是不一样的，局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。同时，如果血清内含有少量纤维蛋白原，那么在低温下也可以形成絮状沉淀4，等到血清再融化时，沉淀就显现出来了。所以，血清的质量也非常重要。
因此对血清反复冻融对细胞是有危害的建议如果几次使用不完应尽量分装使用。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
