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技术文章
只用一招，简单的祛除细胞上的支原体!
点击次数：4170 发布时间：2020/6/9 13:40:04
细胞培养最怕支原体污染，但有一些被污染的细胞不能被丢弃时该怎么办？今天小编把国际上惯用的一个小绝招教给你，简单有效！
如何祛除细胞上的支原体污染？
据研究表明，约98％的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。支原体直径约180~350nm，比细胞小很多，经低速离心与细胞分离。通过反复悬浮冲洗、离心，加上使用我们的Zell Shield®，即可在细胞培养四代以内有效地祛除支原体。
什么是Zell Shield®？
Zell Shield®是一种链青霉素类复合抗生素，
对细胞影响很小，可以有效抑制细胞培养中的
支原体、细菌、霉菌、真菌等微生物增殖。
普通的链霉素、青霉素对支原体没有效果。
那为什么Zell Shield®有效呢？
因为Zell Shield®是由Minerva公司生产的专门针对支原体的抗生素。
德国Minerva公司是由全球著名的罗伯特·科赫研究所中分离出来的，专注于支原体、细菌的污染控制，尤其以支原体和军团菌的祛除、检测而闻名。Zell Shield®是Minerva公司的一产品，不但对细胞培养中的细菌、真菌、霉菌有效，更是对支原体的祛除有确切效果。
具体是怎么操作呢？
1.首先把被支原体污染的细胞消化下来，
放入离心管离心，弃上清。
再加入干净的PBS悬浮冲洗细胞、
低速离心（300~500r/min）、弃上清，
反复三次。
这样可祛除细胞表面60％~70％的支原体，
支原体还剩约30％~40％.
2.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，
传代培养。
这时因培养基中Zell Shield®的抑制作用
细胞培养过程中，
虽然细胞增殖，但残留的支原体无法增殖。
细胞需再次传代时，把第二代细胞消化下来，
离心，弃上清。
加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，
反复三次，
这时，细胞上残留的支原体大约已剩余为最初污染量的10％左右。
3.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，
传代培养。
需再次传代时把第三代细胞消化下来，
离心，弃上清。
加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，
反复三次，
可再次祛除60％~70％的残余支原体，
通过冲洗、抑制、换液等操作，
细胞中支原体的残留污染量大约只剩3％左右。
4.细胞加入含1％Zell Shield®的新鲜培养基，
传代培养。
需再次传代时把第四代细胞消化下来，
离心，弃上清。
加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，
反复三次，
可再次祛除60％~70％的支原体，
此时，支原体残留量大约已低于1％.
支原体的增殖亦有密度要求，
用Zell Shield®处理过四代的细胞，
即便撤掉Zell Shield®，
只要保证没有新的支原体人为再次带入，
原有支原体也无法再增殖，
随着传代，换液，支原体的老化、死亡，
细胞中的支原体污染基本就彻底解决了。
敲黑板，划重点啦
1.每次传代时，重复三次对细胞悬浮冲洗步骤非常重要，操作要正确、规范，以达很好效果！
2.在培养基中加入1％Zell Shield®抑制支原体增殖！
3.使用安全的血清、培养基等试剂，不再有新的支原体加入！
做到以上三点即可确保祛除支原体污染。
Zell Shield®工作原理是什么？
支原体祛除剂Zell Shield®（培养基用）
是一种即用型链青霉素类的复合抗生素，
在培养基中1%的浓度
通过阻止原核生物DNA及蛋白的合成，
抑制细胞培养中遇到的
细菌、真菌、霉菌增殖，
更可以有效、精确地抑制支原体增殖，
且对细胞基本安全。
品名：支原体祛除剂Zell Shield®（培养基用）
生产商：Minerva Biolabs GmbH
生产地：德国
货号：13-0050
规格：50mL/瓶
储存温度：-18℃
使用注意事项：实验室初次使用，注意分装，分装后的小包装Zell Shield®仍-20℃避光冷冻保存，现配现用。
货期：大多数时间国内有现货
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
