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技术文章
Vero细胞的培养方式
点击次数：4581 发布时间：2019/5/23 10:12:11
Vero细胞是世界卫生组织和中国生物制品规程认可的病毒疫苗生产细胞系 。采用 V ero 细胞培养技术生产的病毒疫苗主要包括狂犬病疫苗、脊髓灰质炎疫苗、流感疫苗、乙型脑炎疫苗、出血热疫苗和手足口病疫苗等。Vero细胞有贴壁特性，很大程度上决定了病毒疫苗的生产是通过Vero细胞的微载体固定化培养而得以实现。
军科院生物工程所曾比较了四种商品化微载体对Vero细胞生长的影响。他们先取适量的微载体，然后用PBS浸泡过夜，再吸出PBS，用PBS清洗3次，再高压消毒后，加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，放置在37℃培养箱备用。
Vero细胞则按2X105细胞/ml接种培养瓶和转瓶，再加入含1%新生牛血清的DMEM/F12，置37℃培养箱培养。需要时进行传代。之后将该细胞作为种子细胞。
然后将固定质量的4种微载体分别移入250mlBellco搅拌式细胞培养瓶。Vero细胞接种后，补足培养基至100ml，设置搅拌速度为30r/min悬浮培养。根据培养基颜色在必要时更换新鲜培养基。
研究人员用显微镜观察细胞形态，并取1ml细胞悬液进行细胞计数以测定Vero细胞密度和活力（仪器采用细胞密度和活力自动分析仪），采用多参数生物分析系统定量检测细胞培养上清中的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺浓度，因而可测算葡萄糖比消耗速率，乳酸比生产速率等。
微载体固定化培养被广泛应用于病毒疫苗和重组蛋白药物生产。结果显示，在四种商品化微载体中，Cytodex 1微载体（固体实心微球）效果较好，细胞密度高。同时细胞代谢速率在四种微载体中都很接近。研究者还指出，Vero细胞在接种后24h才基本完成贴壁阶段。
在该次培养中，新生牛血清用量为1%，虽然用量较少，但仍不可缺少。上海威正翔禹生物公司进口的澳洲产Ausbian精制新生牛血清(γ照射)系新西兰血源（来自新西兰政府兽医管理局监管下的具有出口注册证的正规屠宰场），GMP标准生产。
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参考文献
刘红，等. Vero细胞在不同微载体固定化培养中的生长和代谢. 现代生物医学进展. 2012, 12 (36): 7001-7006
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
