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技术文章
威正翔禹生物科普：关于胎牛血清知识问答
点击次数：4875 发布时间：2018/1/29 15:21:36
科普：关于胎牛血清知识问答（一）
前面我们说过了如何鉴别胎牛血清的质量，但是关于如何保存胎牛血清，也是很多初次接触细胞培养的实验人比较关注的问题。今天，小编就为大家分享一下关于胎牛血清的一些常识。
1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？
答：血清推荐融化方法（三步法）
|
| 温度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
| 第一步 | 室温 | 35min | 90min | 100min |
|
| 或15-20℃水浴 | 5min | 18min | 20min |
| 第二步 | 20℃水浴 | 15min | 25min | 30min |
| 第三步 | 37℃水浴 | 20min | 35min | 45min |
但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
2、血清中包含絮状沉淀是什么，怎么处理？
答：沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。
如何避免血清中产生沉淀？
答： 按如下操作可避免沉淀的产生：
（1）解冻血清/分装冻存时，须规则摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
（2）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。
（3）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
4、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？
答：一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
Ausbian胎牛血清精选内毒素极低，产量大于1600瓶（500毫升）的血清批次，满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求；完整的检测报告，及灭病毒服务，为各类临床相关项目的申报提供完整支持。
胎牛血清在细胞培养中受到很多实验人的青睐，今天小编把关于胎牛血清的保存使用做一个整理，希望对于初次接触细胞培养的你能够有所裨益哦！
1、胎牛血清有必要做热灭活吗?
答：实验显示，胎牛血清是不需要做热灭活的。
（1）首先将胎牛血清置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，有些实验室还是把胎牛血清的热灭活作为常规来执行。事实上， 热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。（2）Triglia和Linscott曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1，C6仅达成年动物血清的1-3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50％，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。Pinyopummintr等证明血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化。又有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。（3）此外，热灭活经常给血清产品带来负面的影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，导致很多营养因子的损失。因此，胎牛血清已无需再灭活。
总之，经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量！
2、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？
答：一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化。
那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；（2）血清质量不好，反复冻融的结果；（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
有着“细胞完美搭档”赞誉的Ausbian胎牛血清，早已在各大实验室悄然流行。2014年，Ausbian血清商标已在中国商标局注册，目前此商标属上海威正翔禹生物科技有限公司独家所有。Ausbian血清目前在中国市场主要为澳洲血源的产品，广泛应用于中科院、医科院、军科院、细胞库、北大、清华、复旦、浙大等科研院所及大学的重点细胞实验。
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
