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技术文章
支原体污染的频率和污染来源
点击次数：4601 发布时间：2017/6/21 16:52:41
细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关。实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源。本文威正翔禹/缔一生物为您分析支原体污染的频率和污染来源。
这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上，它们主要存在于人的口咽部。精氨酸支原体和无胆甾原体是另两类细胞培养中的支原体，它们来自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是猪来源的，那么也可能存在猪鼻支原体。图1显示了支原体的常见宿主以及污染细胞的发生率。
图1：在细胞培养中出现的不同种类的支原体频率
支原体在实验室内的扩散来源
McGarrity设计了一个模型，来发现支原体是如何在超净台里的细胞传代过程中发生传播的。他先故意用支原体感染细胞。在超净台中，用胰蛋白酶消化该污染的细胞后发现，活的支原体可从细胞培养瓶外的细胞计数板、移液器、废弃盘中被技术员分离出来。即使过了四至六天，活的支原体仍然可以存在于超净台表面，可被成功恢复。在超净台里，传代完被支原体污染的细胞后，再传代干净的不含支原体的细胞，结果仍然在6周后被检测出支原体阳性。这些结果表明，支原体的传播是多么的快速和容易！它也告我们，要最大限度的避免支原体的污染，因为一瓶细胞发生污染，就会带来支原体传播的可能。
未真正消毒的耗材、培养基和溶液
不恰当的消毒导致污染的另一个原因。高压锅或干热烤箱中推挤太多的物品造成加热不均，使一小部分耗材未得到消毒。灭菌循环时间过短是另一个消毒上犯的错误，特别是对于超过500ml的液体，或者是包含固体成分的溶液，或胶体物质如琼脂、淀粉等。为了实现无菌，灭菌材料的尺寸、质量、性质和体积必须始终考虑。
在无菌和无昆虫区域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的无菌操作也是至关重要的。
实验室人员
在因人导致的细胞支原体污染中，口腔支原体发生率最高，它主要存在人的口咽部。发酵支原体和唾液支原体也在污染的细胞培养液中被检测出来，不过发生率更低。
摘自文献出处：N Laleh，F Parvaneh. Prevention ａnd Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture.Cell Journal, 2012, 13(4): 203
原创作者：北京缔一生物科技有限公司
