癌胚抗原定量测定试剂盒（酶联免疫法）说明书
点击次数：2475 发布时间：2025/3/11 11:30:25
【产品名称】
通用名：癌胚抗原定量测定试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Quantitative Diagnostic Kit for Carcinoembryonic Antigen (ELISA)
【包装规格】96人份/盒。
【预期用途】
本试剂盒用于定量检测人血清或血浆中的癌胚抗原(CEA)浓度。
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心法。用纯化的抗-CEA单克隆抗体包被的微孔板、CEA校准品或样品、及酶标记的抗-CEA单克隆抗体进行反应，特异性地形成固相抗体-抗原-酶标记抗体复合物，加底物显色后，样品中CEA的浓度与显色的深浅成正比。用酶标仪检测各孔的OD值。根据校准曲线计算出样品的含量。
【主要组成成份】
| 组份名称 | 96T | 主要成份及说明 |
| 1 预包被板： | 96孔 | 预包被抗-CEA |
| 2 酶结合物： | 7ml×1瓶 | 含HRP标记抗-CEA |
| 3 校准品： | 1ml×6瓶 | 含不同浓度的CEA |
| 5 显色剂A： | 7ml×1瓶 | 含H2O2 |
| 6 显色剂B： | 7ml×1瓶 | 含TMB |
| 7 浓缩洗涤液： | | 中性缓冲液 |
| 8 终止液： | 7ml×1瓶 | 含稀硫酸 |
| 9 说明书： | 1份 | |
| 10 粘胶板： | 2份 | |
校准品含系列浓度的CEA抗原。
| 校准品 | S0 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 |
| ng/ml | 0 | 5 | 10 | 30 | 60 | 120 |
【储存条件及有效期】
1. 试剂盒应置（2～8）℃存放，包装开启后应尽快用完。不能一次使用完的，应将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好，各个组份密封后置（2～8）℃存放，注意防潮和交叉污染。
2. 有效期为12个月。
【适用仪器】
适用于各种型号酶标仪，必配450nm滤光片，选配603-630nm滤光片。
【样本要求】
1. 血清标本按常规方法由静脉采集，血浆标本可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝。
2. 在2天内测定的标本可放置2～8℃保存。chang期保存应置－20℃以下冻存。
3. 标本应避免溶血、反复冻融。
4. 混浊或有沉淀的标本应离心或过滤澄清后再检测。
5. 需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。
【检验方法】
1. 各种试剂及样品移至室温（15~28℃）平衡半小时。取浓缩洗涤液，观察有无结晶，如有，37℃水浴溶解。然后用蒸馏水或去离子水1:20稀释，混匀后备用。
2. 将预包被板从密封袋中取出，依次设置校准品孔、样本孔。剩余的板条与干燥剂置封口袋中保存。
3. 将校准品、样本各50ul加入对应的微孔中。
4. 每孔加入酶结合物50ul，混匀后置37℃温育30分钟。
5. 弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置20秒后弃去，重复5次后在吸水纸上拍干。
6. 每孔加显色剂A液50ul(1滴)，显色剂B液50 ul(1滴)，混匀后置室温显色8-15分钟，每孔加终止液50ul(1滴)。
7. 尽快用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。或双波长450nm/630nm测定各孔OD值。
【检验结果的解释】
1. 各孔的OD值均需减去零校准(0 ng/ml)的OD值。
2. 作图法：用双对数坐标纸，以S1～S5校准品的浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制校准曲线,根据样品的OD值由校准曲线查出相应浓度。
3. 计算机：以各S1～S5校准品的浓度取对数为X，对应OD值取对数为Y，用最小二乘法拟合出一元一次直线回归方程，将样品OD值代入方程式计算样品浓度。方程式为:log[吸光值]=Blog[浓度]+A
4 酶标仪没有合适拟合模式时，可以采用各种绘图软件来绘制ELISA标准曲线，比如Curve Expert1.4软件
6. 实测结果举例：
单波长仪器（450nm）
| S0 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | 样本 |
| 0.016 | 0.152 | 0.231 | 0.511 | 0.892 | 1.542 | 0.118 |
拟合后曲线公式：
样本X 0.118-0.016=0.102
样本浓度=10(Log(0.102)+1.60)/0.75） = 3.55ng/ml
【检验方法的局限性】
1. 超出校准曲线范围的样品不能直接推算，需要依次1：10稀释多个浓度后再次测定。zui后将测得的CEA含量乘稀释倍数即为该样品实际CEA含量。
2. 轻度溶血、脂血对实验结果干扰不大。
【产品性能指标】
1. 灵敏度：2 ng/ml
2. 精密度：批内变异系数：（CV<10%）；批间变异系数：（CV<15%）
3. 线性范围：1.25-320 ng/ml
4. 相关系数：r>0.99
5. Hook效应：本试剂盒检测CEA浓度超过320 ng/ml后反应进入平台区，吸光度不能反映出样本浓度的增大，建议超出校准曲线范围的样品用含蛋白的中性缓冲液（如含10%小牛血清的0.02M PBS缓冲液）稀释后重新测定，稀释倍数zui大不超过1:1000。
6. 交叉反应：与HSA、IgG、AFP没有交叉反应。
【注意事项】
1. 使用前请详细阅读此说明书。
2. 滴瓶加试剂时可先弃去1-2滴，防止有其气泡影响加样量的准确。
3. 预包被板须密封防潮。
4. 实验前必须将试剂盒恢复至室温，加试剂前应先摇匀。
5. 加样中应避免交叉污染。
6. 不同批号试剂组分不能混用。
7. 应严格控制反应时间和显色时间。
8. 由于方法学或抗体特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此，用不同试剂检测所得结果不应直接相互比较。
9. TMB是未经证实的致癌物，稀硫酸对皮肤及眼睛有刺激性，请小心操作。
