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细胞P38激酶总活性光度法定量检测试剂盒的技术背景
点击次数：3573 发布时间：2021/6/24 17:47:13
细胞P38激酶总活性光度法定量检测试剂盒的技术背景
P38促分裂素原活化蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinases；P38MAPK；EC2.7.11.24），又称为细胞分裂素特异性结合蛋白（Cytokinin Specific Binding Protein；CSBP），属于促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）一类中，包括JNK（c-Jun amino terminal kinase）、ERK（细胞外信号相关激酶；extracellular signal related kinase）、P38、Big MAPK1等的一员。
酵母的同源基因为Hog1p。在哺乳动物细胞中，促分裂素原活化蛋白激酶通路包含有三大通路，P38信号通路是其中之一。P38MAPK属于丝氨酸//苏氨酸（serine/threonine）蛋白激酶家属。和ERK、JNK通路一起，将细胞外信号转化为特定细胞反应。P38通路受到各种促炎性刺激（proinflammatory stimuli）例如生长因子、激素、GPCR配体、促炎性细胞因子白介素1和8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等，以及细胞应激（UV、渗透压休克osmotic shock、内毒素、热休克、化学毒素等）而活化，通过MAPK激酶3和6（MKK3和6）、Jun N-terminal kinase kinase1，以及与MAP3k7IP1/TAB1反应，获得磷酸化后，由胞浆转移到胞核，进而激活下游MK2、MK3、PARK、Mac、MSK、MNK1、转录因子（STAT1、NFAT、ATF2、MEF2C、P53、CHOP、MAX、CDC25B）、MnSOD等，达到调节促炎性细胞因子的转译、各种细胞外刺激的基因表达、细胞周期、分化、凋亡的调节、TNFα、IL1、COX2的生物合成等功能。
P38通路异常，将导致风湿性关节炎、炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)、银屑病（psoriasis）和癌症等，由此P38成为药物靶标。P38 MAPK蛋白激酶有5个亚酶，包括α（MAPK14/SAPK2A）、β（MAPK11）、γ（MAPK12/ERK6/SAPK3）、δ（MAPK13/SAPK4）、P38-2。其中P38α为广谱表达，由MAP激酶激酶（MKK）激活以及MAP3K7IP/TAB1蛋白反应后激活，其作用底物为ATF2、MEF2C、MAX、CDC2B、P53等，与细胞繁殖、分化、细胞周期、转录调节、炎性反应、细胞因子合成、发育（红细胞、胎盘）等有关；P38β为广谱表达，主要由MAP激酶激酶6（MKK6）激活，其作用底物为ATF2/CREB2；P38γ主要在骨骼肌组织表达，是成肌细胞（myoblast）分化为肌管（myotube）的信号传导者；P38δ在肺、胰腺、肾、小肠、睾丸等组织高表达，主要由MAP激酶激酶3和6（MKK3和6）激活，其作用底物为ATF2、Tau、Stathmin、eEF2K等，与角质形成细胞（keratinocyte）分化有关。P38磷酸化目标序列为IPTTPITTTYFFFKKK。基于底物IPTTPITTTYFFFKKK，在P38敏感性抑制剂SB220025（5-（2-Amino-4-pyrimidinyl）-4-(4-fluorophenyl) -1-(4-piperidinlyl)imidazole）的存在与否的情况下，受到P38激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析P38激酶的总活性。
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