细胞ERK1/2激酶总活性光度法定量检测试剂盒酶标仪测定
1）样品总活性测定
1．在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品
2．分别移取130微升缓冲液（Reagent C）到96孔板里
3．分别加入20微升酶促液（Reagent D）
4．分别加入20微升反应液（Reagent E）
5．分别加入20微升底物液（Reagent F）
6．轻轻摇动96孔板
7．在30℃温度下孵育3分钟
8．分别加入10微升阴性液（Reagent G）或待测样品（100微克细胞裂解悬液蛋白）到相应孔里（注意：样品须清澈）
9．轻轻摇动96孔板
10．即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和5分钟读数
11．活性计算：
[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 0.2（体系容量；毫升）]÷[0.010（样品容量；毫升）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 0.5（光径距离；厘米）X 5（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克
单位＝微摩尔NADH/分钟
或
[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X 0.2（体系容量；毫升）]÷[0.10（样品蛋白量；毫克）X 6.22（毫摩尔吸光系数）X 0.5 （光径距离；厘米）X 5（反应时间；分钟）]＝单位/毫克
单位＝微摩尔NADH/分钟
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