二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒分光光度法
正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
规格：50 管/48 样
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒分光光度法
产品内容：
提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用加入 1.75mL
蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存一周；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用加入 1.75mL
蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存一周；
产品说明： 核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着 CO2 的固定，同时又制约着碳素向 Calvin 循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。
测定原理：
（1）在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO2 结合，产生 2分子的 3-磷酸甘油酸（PGA）；
（2）PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着 NADH 氧化生成 NAD+；
（3）在 340 nm NADH 有特征吸收峰，而 NAD+没有此吸收峰，因此测定 340nm 吸光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰
和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液制备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用在试剂二中加入 45mL 试剂一，充分混匀，在 25℃孵育 5min；现配现用。
3、测定：在 1mL 石英比色皿中依次加入 30uL样本、35uL 试剂三、35uL 试剂四和 900uL 工作液，混匀；记录 340nm 处 20 s 时吸光值 A1和 2 min 20 s 时的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。
三、Rubisco 活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算
单位的定义：25℃中 1 mg 蛋白 1 min 氧化 1 n mol NADH。
Rubisco 活力（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T =2680×ΔA÷Cpr
此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒。
2、按样本鲜重计算
单位的定义：25℃中 1 g 组织 1 min 氧化 1 nmol NADH。
Rubisco 活力（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d ）×109]÷(V 样÷V 样×W)÷T=2680×ΔA÷W
上述计算公式中各符合含义：V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；W：样本质量，g。
