猪圆环病毒II型IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书
【产品名称】
通用名称：猪圆环病毒2型抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Porcine Circovirus Type 2 Antibody Test Kit (ELISA), PCV2 Ab
【包装规格】
96T/盒
【预期用途】
本试剂盒用于定性测定猪血清中II型圆环病毒IgG抗体。用于评估猪场猪圆环病毒疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断以及猪圆环病毒病的流行病学调查。
【检验原理】
本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪圆环抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的PCV-IgG结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+PCV-IgG+酶标抗猪IgG抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与PCV-IgG的量成正比，当显色超过设定的临界值时结果判为阳性，表明免疫有效或有自然感染。
【试剂盒组成】
| 1. | 猪圆环病毒2型抗原预包被微孔板条 | 96T×1 |
| 2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×1 |
| 3. | 样品稀释液 (蓝盖) | 25ml×1 |
| 4. | 20X浓缩洗涤液 (透明盖) | 25ml×1 |
| 5. | 底物液A (棕盖) | 7ml×1 |
| 6. | 底物液B (黑盖) | 7ml×1 |
| 7. | 终止液 (黄盖) | 7ml×1 |
| 8. | 阳性对照 (蓝盖，已灭活) | 0.5ml×1 |
| 9. | 阴性对照 (蓝盖，已灭活) | 0.5ml×1 |
| 10. | 盖板膜 | 1张 |
| 11. | 说明书 | 1份 |
【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，
长期需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对
照不用稀释。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作
20倍稀释。
【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl；空白对
照孔不加。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。
【结果判定】
定义：N=阴性对照孔平均A值；P=阳性对照孔平均A值；S=样品孔A值；S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。
1.正常情况下P/N≥2.1即试验成立；否则不成立。
2.S/P≥0.4时判为阳性，S/P＜0.3时判为阴性，0.3≤S/P＜0.4时判为可疑。
当本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪圆环病毒IgG抗体，不能区别疫苗免疫和野毒感染。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板
开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月)。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
【储 存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
