本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人MEST（MEST）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人MEST（MEST）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人MEST（MEST）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。
操作程序
1．标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
| 50ng/ml | （5号标准品） | 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 25ng/ml | （4号标准品） | 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 12.5ng/ml | （3号标准品） | 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 6.25ng/ml | （2号标准品） | 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 3.12ng/ml | （1号标准品） | 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加样：1）空白孔：（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗甲胎蛋白(AFP)抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）标准品孔:加入标准品50μl，链霉亲和素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素标记抗体，故在操作时不加，只加链霉素-HRP）；3）样本反应孔：加入样本40μl，然后各加入抗甲胎蛋白(AFP)抗体10μl、链霉亲和素-HRP（空白孔除外）50μl。盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
4．配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5．洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6．显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7．终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8．测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
