本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人Notch-1（）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人Notch-1（）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人Notch-1（）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
【操作步骤】
1. 从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃。
2. 预留空白孔（若使用双波长读板，空白孔可以不设）。
3. 分别将标本或不同浓度人IL-2标准品（0pg/ml孔加标准品稀释液）加入相应孔中(100μl/孔)，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育90分钟。
4. 提前30分钟制备生物素化人IL-2抗体工作液。
5. 洗板3次。
6. 加入生物素化人IL-2抗体工作液(100μl/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育60分钟。
7. 提前30分钟制备酶结合物工作液。室温避光放置。
8. 洗板3次。
9. 除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱，避光孵育30分钟。
10. 洗板5次。
11. 加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟。
12. 加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值(10分钟内)。
【结果判断】
1．每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）
2．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3进行结果计算。
3．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线来计算标本含量。
