本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人N端前脑钠素（NT-proBNP）ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人N端前脑钠素（NT-proBNP）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人N端前脑钠素（NT-proBNP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
【检测前准备工作】
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温后方可进行试验。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回 。
3. 人IL-2标准品: 加入标准品稀释液1.0ml至冻干人IL-2标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为1000 pg/ml)，之后在管身标注①，然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使用以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/ml)。注意：务必要bao证冻干标准品che底溶解和混匀。
4. 标准品稀释方法图例： 取7支洁净的试剂管，分别标注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧. 每管加入300μl标准品稀释液。从第①管内取出300μl加入到第②管，混匀后，再从第②管取出300μl加入到第③管，以此类推至第⑦管。第⑧管为标准品稀释液，作为阴性对照使用。
注：复溶标准品原液（1000 pg/ml）请废弃，不可重复使用。
5.生物素化人IL-2抗体工作液：按当次试验所需用量，用抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)，配置成生物素化抗体工作液。使用前30分钟准备。仅供当日使用。
6.酶结合物工作液：按当次试验所需要用量，用酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物(1:100)，配置成酶结合物工作液。使用前30分钟准备。仅供当日使用。
7.TMB显色工作液：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份（9：1）的比例配制TMB显色工作液。
【洗涤方法】
1．自动洗板机：要求注入的洗涤液为350μl，注入与吸出间隔20－30秒。确保机器运用熟练后，再投入实验中使用。
2．手工洗板：每孔加洗涤液350μl，静置30秒后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干。手工洗板时，注意加入洗液的过程中，不要造成孔间污染，从而出现跳孔的现象。
