植物组织蔗糖含量微量法检测试剂盒说明书
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂 10mg×1 支，4℃保存，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，用水稀释 10 倍，备用，即1mg/mL;
试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂 0.5g×1 瓶，常温保存。
产品介绍：
蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。酸性条件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤
一、样品制备：
称取0.1g 样本，常温研碎，加入0.5mL 提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于80℃水浴锅中10min，振荡3~5 次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清，加入2mg试剂五，80℃脱色30min，再加入0.5mL 提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。
二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂（µL） 空白管 标准管 测定管
样本 25
试剂一 25
蒸馏水 25
试剂二 15 15 15
混匀，100℃煮沸 5min 左右（盖紧，防止水分散失）
试剂三 175 175 175
试剂四 50 50 50
混匀，沸水浴反应 10min 左右，冷却后取 200µL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
三、蔗糖含量计算：
1、按照蛋白质含量计算
蔗糖含量（mg/mg prot）= (C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样品质量计算
蔗糖含量(mg/g 鲜重）=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
C 标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
