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微细毛圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
价格：￥ 3990
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:56
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详细内容
货号： XY955140P15
微细毛圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
Trichostrongylus tenuis
产品及特点：
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据微细毛圆线虫高度保守区设计，不会跟其他病毒 DNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20µL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分：
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500 µL（本色盖） |
试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
试剂三 | 微细毛圆线虫qPCR引物混合液 | 100 µL（白盖） |
试剂四 | 微细毛圆线虫qPCR探针 | 50 µL（棕色管） |
试剂五 | 微细毛圆线虫探针法qPCR阳性对照 (1×10E8拷贝/µL) | 50 µL（红盖） |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂： 样品 RNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/µL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 µL 荧光 PCR 专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 µL 1×10E8 拷贝/µL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 µL 1×10E7 拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 µL 1×10E6 拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备：
7. 如果有 N 个样品，设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10µL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qRT-PCR 反应（20µL 体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）：
成份 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管（2⁻⁷管） |
2×Probe qPCR MagicMix | 10µL | 10µL | 各10µL |
微细毛圆线虫qPCR探针 | 1µL | 1µL | 各1µL |
微细毛圆线虫探针法 qPCR引物混合液 | 2µL | 2µL | 各2µL |
N+2个待测DNA模板 | 7µL | -- | -- |
超纯水 | -- | 7µL | -- |
第7步所得标准曲线样品稀释液（2⁻⁷号） | -- | -- | 各7µL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 3 min |
PCR 反应 （40 个循环） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min（采集FAM通道的荧光信号） |
四、数据处理：
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct值小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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