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枯草芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
价格：￥ 3960
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:49:03
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详细内容
货号： XY161T
枯草芽孢杆菌荧光定量 PCR 试剂盒
产品及特点
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），是芽孢杆菌属的一种。革兰氏阳性菌， 可形成内生抗逆芽孢，芽孢 0.6-0.9×1.0-1.5 微米，椭圆到柱状，位于菌体中 央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。生长、繁殖速度较快，菌落表面粗糙不透明， 污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，是一种需氧菌。可利用 蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此 菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的 有机物中，易在枯草浸汁中繁殖。有的菌株是α淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产 菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取 5'-核苷酸酶的菌种。因此快速灵敏检测枯草芽孢杆菌有重要意义。
本产品就是以 探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测枯草芽孢杆菌的试剂盒。
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据枯草芽孢杆菌高度保守区设计。
5. 本产品足够 50 次 20µL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分：
成分 | 编号 | 五孔盒包装 |
2×Probe qPCR MagicMix | 试剂一 | 0.5 mL |
荧光PCR专用模板稀释液 | 试剂二 | 1 mL |
枯草芽孢杆菌探针法 qPCR 引物 混合液 | 试剂三 | 100µL |
枯草芽孢杆菌 qPCR 探针 | 试剂四 | 50 µL |
枯草芽孢杆菌探针法 qPCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/µL) | 试剂五 | 50 µL |
使用手册 | 1份 |
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂： 样品 RNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/µL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
使用方法
一、稀释标准曲线样品（10E2-10E7 拷贝/µL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DN段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 µL 荧光 PCR 专用模板稀释液，用带芯枪头， 下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 µL1×10E8 拷贝/µL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 µL 1×10E7 拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 µL 1×10E6 拷贝/µL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/µL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备：
7. 如果有 N 个样品，设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10µL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qRT-PCR 反应（20µL 体系，在样品制备室进行）：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用 水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后加）：
成分 | 样品管 N+2个 | PCR阴性对照管 | 标准曲线样品管 （1-6管） |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 µL | 10 µL | 各10 µL |
枯草芽孢杆菌 qPCR 探针 | 1 µL | 1 µL | 各1 µL |
枯草芽孢杆菌探针法 qPCR 引物 混合液 | 2 µL | 2 µL | 各2 µL |
N+2 个待测 DNA 模板 | 7 µL | 不加 | 不加 |
超纯水 | 不加 | 7 µL | 不加 |
第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2⁻⁷ 号） | 不加 | 不加 | 各 7 µL（2 号样 到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR反应 （40个循环） | 95℃ | 15sec |
60℃ | 60sec（采集FAM通道的荧光信号） |
四、数据处理：
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于
30。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 28。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 35 则为阴性，如果小 于或等于 28 则为阳性。如果在 28-30 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 30，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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